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仪器操作

液相色谱-串联四级杆质谱仪LC-QQQ-MS(Agilent 6460)操作规程

发布者:中国科学院生物物理研究所蛋白质科学研究平台 时间:2016年09月07日

 

操作流程:

1. 准备样品(样品制备,复杂样品要进行必要的前处理,标准品)。

2. 准备流动相、色谱柱。

3. 清洗流动相管路,用新的流动相,置换旧的流动相。打开Purge阀,两个通道各50%5ml/min5min,降低流速到方法设定值,关掉purge阀。

4. 建立方法/调用方法(包括调用正确的调谐文件,设定LCMS参数等)。不接柱子,0.2ml/min流速,自动进样器直接进样标准品,MS2Scan模式,选定分子量范围,看样品是否纯,MS2SIM模式优化FragmentorProduct ion scan模式,优化CE并选择定性和定量的子离子,同时分析多个化合物,依次优化。

5. 平衡系统(色谱柱、柱温、离子源温度等)。10倍柱体积以上初始流动相平衡色谱柱再进样,如果有同分异构体,单独进样确定各自的保留时间,再混合进样,看是否能够达到基线分离,如不能,优化色谱梯度或调整样品pH值等。

6. 填写样品信息。

7. 运行方法。

8. 建立工作表。

9. 在定性软件中浏览数据。

10.定量分析

File,new batch,Add samples,save batch;Method, new MRM,选一个高浓度的标准品,输入浓度,稀释倍数,几个level,creat level;Validate,Save & exit,Analyzer Batch

 

注意事项

1.因为任何原因造成的断电,请联系管理员或关闭仪器面板左下角的开关,等待供电恢复 10 分钟以上再开启电源,否则有可能烧毁电路板。

2. 气体供应:实验开始前,如果发现液氮罐液体存量不足,请及时联系管理员。

3. 状态确认:质谱仪正常工作时,前级真空 1.5 ~ 3Torr;高真空1.5x10-5 ~ 2.5x10-5 Torr。在有喷雾时,毛细管电流应基本稳定,无跳跃式波动。

4. 溶剂管理:使用质谱仪器时,建议使用进口分装的色谱纯以上级别的有机试剂。水相请使用相当于 Milli Q 级别的机制纯净水,或者新鲜的市售小包装饮用纯净水。水相、缓冲溶液以及含有机相不足 10%的水溶液,放置超过 2 天后请及时更换。 注意!下列的溶剂添加剂会产生离子化抑制,请慎用:三氟乙酸,会影响负离子模式离子化,并造成该模式下 m/z = 113,227,245 的污染峰。有机胺类,尤其三乙胺会影响正离子模式离子化,并造成该模式下 m/z = 102 的污染峰。注意!下列的溶剂添加剂会产生严重的离子化抑制,建议禁用:强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐(如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等)、表面活性剂、离子对试剂。

5. 日常维护:每天实验完成之后,使用 1:1 异丙醇-水溶液清洗或擦洗离子源 注意!清洗离子源时请勿将溶液喷入毛细管入口。如需清洁毛细管或者进行进一步的清洗,请联系管理员。

6. 实验结束:实验结束后,选择质谱到 Standby,将质谱系统休眠。

7. 系统安全: 注意!质谱连接的电脑禁止更改网络设置,禁止安装防火墙。尽量避免使用 U 盘等移动存储设备。 请使用光盘刻录来完成数据的拷贝。

 

仪器管理员:谢振声

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